A noite escura da alma é tanto um poema como um tratado que comenta o poema, e os dois estão contidos nesta edição. Em prosa ou em poesia, ambos exploram a jornada espiritual da alma em sua busca por Deus, especialmente nos momentos de desolação e aparente abandono divino.Com o passar dos séculos, a expressão "noite escura" se incorporou à doutrina espiritual como símbolo das experiências purgativas pelas quais os cristãos devem passar até se elevarem à perfeita união mística com Deus. Inspirado no livro bíblico Cântico dos cânticos - no qual a esposa apaixonada sai de casa em plena noite à procura do seu Amado pelas ruas e praças de uma cidade adormecida -, São João da Cruz compara o anseio espiritual por Deus ao desejo de união conjugal. Para consumar, ainda nesta vida, o matrimônio místico com o seu Esposo, que é Cristo, a alma precisa se desnudar do apego a si mesma e às criaturas, pois "não se pode chegar a tal união sem grande pureza, e esta pureza não se alcança sem grande desapego de toda coisa criada, e sem viva mortificação" (livro 2, capítulo 24, parágrafo 4).